Donne moi un topo concernant le bilan lipidique je suis interne en pharmacie les objectifs : Physiologie Physiopathologie Prelevement Les anomalies Les normes et les valeurs de reference Juste cette partie formule ce paragraphe concernant les les methodes de refererence:Méthode de référence 1. Cholestérol total (CT) La méthode de référence classique est la méthode d’Abell-Kendall. 1- cholestérol libre + estérifié 2- saponification par koh puis réaction de Liebermann-Burchard → couleur → mesure spectrophotométrique. spectrométrie de masse chromatographie en phase gazeuse (GC-MS) on sépare le cholestérol par chromatographie en phase gazeuse, puis on l’identifie et le quantifie avec la spectrométrie de masse. 2. Triglycérides (TG) Référence basée sur la spectrométrie de masse GC-MS On ajoute d’abord une substance de référence marquée qui ressemble au composé à mesurer, un isotope Ensuite, les triglycérides sont transformés pour obtenir notamment du glycérol. Les constituants sont ensuite séparés par chromatographie en phase gazeuse (GC). 3. HDL-cholestérol (HDL-C) La méthode de référence est basée sur la β-quantification, ultracentrifugation Les lipoprotéines se répartissent selon leur densité. On peut ainsi séparer principalement les VLDL des autres lipoprotéines. Ensuite, on utilise un traitement qui fait précipiter les LDL et autres particules contenant l’apoB. Les HDL restent dans la partie liquide. 4. LDL-cholestérol (LDL-C) La méthode de référence classique est également la β-quantification, qui comprend une ultracentrifugation puis une étape de précipitation par héparine-Mn²⁺. Méthodes de routine: CHOLESTÉROL TOTAL — TC Dans le sang, une partie du cholestérol est sous forme : • cholestérol libre • esters de cholestérol Une méthode enzymatique colorimétrique CHOD-POD est appliquée pour doser le cholestérol total en 3 étapes: Étape 1 : hydrolyse des esters de cholestérol par la cholestérol-estérase. La réaction donne du: cholestérol libre + acide gras Étape 2 : oxydation du cholestérol Le cholestérol libre est ensuite oxydé par la cholestérol-oxydase (CHOD). Et on obtient: • cholest-4-én-3-one • peroxyde d’hydrogène H₂O₂ C. Étape colorimétrique Le H₂O₂ produit réagit avec : • 4-aminoantipyrine (4-AAP) • phénol en présence de peroxydase (POD). Il se forme un composé quinone-imine rouge et il mesure l’absorbance. 3. TRIGLYCÉRIDES — TRIGL On la transforme progressivement jusqu’à produire du H₂O₂, puis une couleur. Première réaction : lipoprotéine-lipase qui hydrolyse le triglycéride et donne le Glycérol + 3 acides gras Deuxième réaction : glycerol kinase Le glycérol produit est ensuite phosphorylé. En présence de : • ATP • Mg²⁺ l’enzyme glycerol kinase (GK) → glycérol-3-phosphate + ADP Donc le glycérol est maintenant sous forme de glycérol-3-phosphate. Troisième réaction : glycerol phosphate oxidase Elle transforme : glycérol-3-phosphate + O₂ → dihydroxyacétone phosphate + H₂O₂ qui va per
Donne moi un topo concernant le bilan lipidique je suis interne en pharmacie les objectifs : Physiologie Physiopathologie Prelevement Les anomalies Les normes et les valeurs de reference Juste cette partie formule ce paragraphe concernant les les methodes de refererence:Méthode de référence 1. Cholestérol total (CT) La méthode de référence classique est la méthode d’Abell-Kendall. 1- cholestérol libre + estérifié 2- saponification par koh puis réaction de Liebermann-Burchard → couleur → mesure spectrophotométrique. spectrométrie de masse chromatographie en phase gazeuse (GC-MS) on sépare le cholestérol par chromatographie en phase gazeuse, puis on l’identifie et le quantifie avec la spectrométrie de masse. 2. Triglycérides (TG) Référence basée sur la spectrométrie de masse GC-MS On ajoute d’abord une substance de référence marquée qui ressemble au composé à mesurer, un isotope Ensuite, les triglycérides sont transformés pour obtenir notamment du glycérol. Les constituants sont ensuite séparés par chromatographie en phase gazeuse (GC). 3. HDL-cholestérol (HDL-C) La méthode de référence est basée sur la β-quantification, ultracentrifugation Les lipoprotéines se répartissent selon leur densité. On peut ainsi séparer principalement les VLDL des autres lipoprotéines. Ensuite, on utilise un traitement qui fait précipiter les LDL et autres particules contenant l’apoB. Les HDL restent dans la partie liquide. 4. LDL-cholestérol (LDL-C) La méthode de référence classique est également la β-quantification, qui comprend une ultracentrifugation puis une étape de précipitation par héparine-Mn²⁺. Méthodes de routine: CHOLESTÉROL TOTAL — TC Dans le sang, une partie du cholestérol est sous forme : • cholestérol libre • esters de cholestérol Une méthode enzymatique colorimétrique CHOD-POD est appliquée pour doser le cholestérol total en 3 étapes: Étape 1 : hydrolyse des esters de cholestérol par la cholestérol-estérase. La réaction donne du: cholestérol libre + acide gras Étape 2 : oxydation du cholestérol Le cholestérol libre est ensuite oxydé par la cholestérol-oxydase (CHOD). Et on obtient: • cholest-4-én-3-one • peroxyde d’hydrogène H₂O₂ C. Étape colorimétrique Le H₂O₂ produit réagit avec : • 4-aminoantipyrine (4-AAP) • phénol en présence de peroxydase (POD). Il se forme un composé quinone-imine rouge et il mesure l’absorbance. 3. TRIGLYCÉRIDES — TRIGL On la transforme progressivement jusqu’à produire du H₂O₂, puis une couleur. Première réaction : lipoprotéine-lipase qui hydrolyse le triglycéride et donne le Glycérol + 3 acides gras Deuxième réaction : glycerol kinase Le glycérol produit est ensuite phosphorylé. En présence de : • ATP • Mg²⁺ l’enzyme glycerol kinase (GK) → glycérol-3-phosphate + ADP Donc le glycérol est maintenant sous forme de glycérol-3-phosphate. Troisième réaction : glycerol phosphate oxidase Elle transforme : glycérol-3-phosphate + O₂ → dihydroxyacétone phosphate + H₂O₂ qui va per
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Ce document présente les méthodes de référence pour l'analyse des lipides, incluant des techniques comme la méthode d'Abell-Kendall et le GC-MS pour le CT, ainsi que des approches de routine pour le LDL-C et le TG. Il aborde également la lecture pratique pour les internes, soulignant l'importance de comparer les méthodes analytiques, leur spécificité et les contraintes préanalytiques, tout en vérifiant les unités et les valeurs de référence locales.